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液相色譜柱樣品的前處理及流動相流速的選擇


湖南弘林科學儀器有限公司 / 2023-02-20

  在使用實驗室設備色譜柱之前,最好對色譜柱的性能進行測試,并將結果保存下來,作為日后評估色譜柱性能變化的參考。但需要注意的是,由于樣品、流動相、柱溫等條件的不同,色譜柱性能可能會有所不同;另外,色譜柱性能測試是按照色譜柱出廠報告中的條件進行的(出廠測試中使用的條件是最好的),只有這樣,測得的結果才具有可比性。

實驗室設備

  1.樣品預處理:
  1)最好用流動相溶解樣品。
  2)用預處理柱去除樣品中強極性或柱填料不可逆吸附的雜質(zhì)。
  3)用0.45μm濾膜去除顆粒雜質(zhì)。
  2.流動相的制備:
  液相色譜是通過柱填料和流動相之間的質(zhì)量交換實現(xiàn)樣品組分的分離,因此要求流動相具有以下特性:
  1)流動相相對于樣品有一定的溶解度,以保證樣品成分不會在柱內(nèi)沉淀(或長時間留在柱內(nèi))。
  2)流動相是惰性的,不與樣品發(fā)生反應(特殊情況除外)。
  3)流動相的粘度應盡可能小,這樣在使用長分析柱時才能獲得良好的分離效果;同時可以降低色譜柱的壓降,延長液泵的使用壽命(提高溫度可以降低流動相的粘度)。
  4)流動相的物理和化學性質(zhì)應適合所用的檢測器。如果使用紫外檢測器,最好使用低紫外吸收的溶劑。
  5)流動相的沸點不能太低,否則容易產(chǎn)生氣泡,使實驗無法進行。
  6)流動相配好后,必須脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體不僅有利于檢測,而且可以防止流動相中的微量氧與樣品相互作用。
  3.流動相流速的選擇:
  因為柱效是柱中流動相的線速度的函數(shù),所以通過使用不同的速度可以獲得不同的柱效。對于特定的色譜柱,為了追求最佳的柱效,最好使用最佳的流速。內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱,流速一般為1ml/min,內(nèi)徑為4.0mm的色譜柱,流速為0.8ml/min。
  當選擇最佳流速時,分析時間可能會延長。可采用改變流動相洗滌強度的方法來縮短分析時間(如使用反相柱時可適當增加甲醇或乙腈的含量)。

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